Mit Schizophyllum Commune werden: Erstellen Sie eine sterile Kultur aus gefundenen Pilzen - Gunook

2024 Autor: John Day | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2024-01-30 07:21

Dieses anweisbare konzentriert sich darauf, zu erklären, wie man eine sterile Kultur des Pilzes Schizophyllum Commune (allgemeiner Name Split Gill Pilz) auf einer Petrischale mit gefundenen Pilzen erstellt. Es wurde festgestellt, dass Schizophyllum Commune über 28.000 Geschlechter hat, auf allen Kontinenten außer der Antarktis zu finden ist und die Fähigkeit hat (wie andere "Weiß- und Braunfäulepilze"), endokrinschädigende Umweltverschmutzungen abzubauen (Kunststoffe, Hormone, die industrielle Petrochemikalien nachahmen, wie z der Dünger Atrazin, der Weichmacher Bisphenol-A oder das synthetische Hormon Diethylstilbestrol).

Ich gehe auf Techniken zur Identifizierung von Wildpilzen ein, wie man eine Nähragar-Petrischale herstellt und wie Sie Ihre gefundenen Pilze verwenden, um eine sterile isolierte Kultur in Ihrer Petrischale zu züchten. Andere instructables in dieser Serie behandeln Techniken wie die genetische Identifizierung von Pilzen, einfache enzymatische Assays, um die Fähigkeit des Pilzes zu testen, Kunststoffe und Hormone nachzuahmen, die Umweltverschmutzung nachahmen, und wie man Käse mit S. Commune herstellt.

Dieses Projekt entstand aus der gemeinsamen Arbeit von Mary Maggic, Paula Pin und mir während eines Aufenthalts im HANGAR in Barcelona, Spanien, Herbst September 2018. Für weitere Informationen über das Projekt lesen Sie weiter ~~ oder überspringen Sie alle Bla Bla und gehen Sie direkt zu Schritt 1 für das Tutorial:)

Bilder stammen aus dem Schizophyllum Commune Fanzine ~ Dateien können hier kostenlos heruntergeladen werden

Während der Residency waren unsere drei Hauptziele:

1 ~ Recherchieren und verdauen Sie die wissenschaftliche Literatur über Schizophyllum Commune und seine verschiedenen Wechselwirkungen mit Hormonen und endokrin wirksamen petrochemischen Schadstoffen. S. Commune ist einer von vielen "Weiß- und Braunfäule"-Pilzen mit der Fähigkeit, hormonelle und endokrine Umweltverschmutzung abzubauen. Diese Pilze ernähren sich von Bäumen, indem sie "lignocellulosehaltige" Enzyme aus ihren vernetzten Körpern oder "Myzelien" ausscheiden, und die Enzyme sind in der Lage, die Zellulose und das Lignin, aus denen Bäume bestehen, abzubauen. Aufgrund struktureller Ähnlichkeiten zwischen Cellulose, Lignin und EDS' / Hormonen wie Atrazin, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol und Nonylphenolen können die von den Pilzen abgesonderten "lignocellulosehaltigen" Enzyme auch eine Vielzahl von Giftstoffen abbauen. Darüber hinaus produziert S. Commune immunstimulierende Polysaccharide, die zur Vorbeugung und Behandlung von Krebs hilfreich sind (in Japan zur Behandlung von Gebärmutterhalskrebs zugelassen), können die phytoöstrogenen Eigenschaften bestimmter Pflanzen durch Fermentation verbessern, können anstelle von Lab und Lactobacilius verwendet werden Käseherstellungsverfahren und produzieren Thrombin-Gerinnsel auflösende Enzyme (nützlich bei der Behandlung von Thrombose). Seltsamerweise werden dieselben "Beta-Glucane", die mit kochendem Wasser als Krebsbehandlungen und Immunstimulanzien extrahiert werden können, auch von der Erdölindustrie verwendet, um die Ölausbeuten zu steigern, wodurch S. Commune in einer bizarren Rückkopplungsschleife an die Produktion der endokrin wirksamen Stoffe gebunden wird Petrochemikalien, die es abbauen und sanieren kann.

2 ~ Entwickeln Sie DIY- und DIWO-Protokolle (do it with other), die diese Rezepte für die Arbeit mit EDCs und Pilzen vereinfachen, um kodifiziertes wissenschaftliches Wissen in eine leichter zugängliche Sprache zu übersetzen. Verwenden Sie diese Rezepte zur Aufklärung, zum Hinterfragen, zum Widerstand gegen molekulare Kolonisationen und zum Erstellen neuer Erzählungen über das Werden mehrerer Arten und unsere kollektive Mutagenese.

3 ~ Fordern Sie den dominanten cisheteronormativen, queerphoben Diskurs über endokrine Disrupting Chemicals (EDCs) heraus. Um das Stipendium von Malin Ah-King und Eva Hayward zu diesen Themen zu zitieren: „Viele Nachrichtenagenturen berichten über diese erschreckenden endokrinen Geschichten aus unseren Hinterhöfen die Sex und Sexualität bedroht. Anstatt die vielen anderen Gesundheitsrisiken im Zusammenhang mit der Exposition gegenüber toxischen Stoffen anzusprechen, stehen die sensationellsten und polemischsten Themen zur Debatte und kritischen Reaktion. Es wirft Fragen auf: Warum ist Sex wichtiger als Krebs, Autoimmunerkrankungen, und sogar der Tod? Welche kulturellen Nerven (von denen viele globalisiert sind) werden ausgelöst? Und wie richten wir die Debatte für diejenigen von uns mit feministischen Anliegen neu aus, weg von Essentialismus, Sexismus und Heteronormativität? (Toxische Geschlechter).

Schizophyllum Commune ist ein einzigartiger "Weißfäulepilz", da festgestellt wurde, dass er über 28.000 genetische Geschlechter hat. Viele vermuten, dass diese Anpassung die unglaubliche genetische Vielfalt dieser Spezies ermöglicht hat, die auf allen Kontinenten der Welt außer der Antarktis existiert. Wir wollten die schöne sexuelle Vielfalt dieses Organismus als ein Beispiel für die Seltsamkeit der Biologie feiern. Der vorherrschende Diskurs um EDCs in den Medien und sogar von Umweltaktivisten konzentriert sich stark auf unwissenschaftliche Narrative, dass diese Moleküle bestimmte Sexualitäten oder Geschlechter verursachen, die unsere Gesellschaft pathologisiert, als nicht normativ bezeichnet und oft versucht, sie zu beseitigen oder zu vermeiden. Der öffentliche Aufschrei über EDCs wissenschaftlich unrealistische (Hormone und endokrine Disruptoren machen die Menschen nicht queer oder trans) machen nicht nur den sexpanischen, queerphobischen Fokus des öffentlichen Aufschreis, sondern er ignoriert auch all die verheerend realen Auswirkungen, die wir mit EDCs in Verbindung bringen können: Fettleibigkeit, Schilddrüsenerkrankungen, bestimmte Krebsarten und andere Gesundheitsrisiken.

Schritt 1: Finden Sie Schizophyllum Commune, die in Ihrer Gemeinde lebt

Sterile Kulturen von Schizophyllum Commune in Laborqualität können für etwa 350 US-Dollar von einer mikrobiologischen Kulturbank wie ATCC erworben werden.

Ich hatte es leicht, weil ich über Schizophyllum Commune gelesen hatte und zufällig eines Tages bemerkte, dass es auf einem Baum vor meiner Wohnung wuchs. Wenn Sie nicht so viel Glück haben und zufällig auf S. Commune in Ihrer Nachbarschaft stoßen, sollten Sie in ein Waldgebiet gehen, um nach "Bracket"-Pilzen zu suchen, die auf kränklichen Hartholzbäumen wachsen (Bäume, die aussehen, als würden sie es nicht tun) zu gut) oder umgestürzte Bäume. S. Commune ist einer der weltweit am häufigsten vorkommenden Pilze und kann praktisch überall dort gefunden werden, wo Hartholz wachsen kann.

Mushroomobserver.org bietet eine großartige detaillierte Beschreibung, wo und wann Sie S. Commune wahrscheinlich finden, sowie wie Sie es identifizieren und wie Sie "gleich aussehen" vermeiden können, die zu einer Fehlidentifikation führen könnten:

IDENTIFIKATION: Schizophyllum commune ist leicht an seinen gespaltenen Kiemen, dem dichten Haar und der fächerförmigen Kappe zu erkennen. Die Kappe ist 1-4,5 cm breit und hat normalerweise eine Muschel- oder Fächerform mit grauer bis weißlicher Oberfläche. Basidiosporen sind 5-7,5 × 2 -3 Mikrometer Ein ähnlicher Pilz, der als „Crimped Gill“Plicaturopsis crispa bekannt ist, ist nicht so weit verbreitet.

LEBENSRAUM: Schizophyllum commune wächst auf Hartholz unter Verwendung von Enzymen zum Abbau von Lignin und verursacht „Weißfäule“. So ist es in den meisten Waldgebieten zu finden. Es kann das ganze Jahr über gefunden werden, da es austrocknet, unter besseren Bedingungen rehydriert und dann weiter sporuliert.

Dieser Pilz kann bei Bäumen mit kleinem Durchmesser parasitär sein, die durch andere Faktoren wie Trockenheit gestresst sind.

LOOK ALIKES: Plicaturopsis crispa oder die „Crimped Gill“ähnelt der Split Gill. Es hat auch einen muschel- / fächerförmigen Fruchtkörper. Die Kappe ist jedoch rotbraun oder gelbbraun, und die Unterseite ist sehr markant. Es hat gekräuselte, aderartige Kiemen, die sich stark von den gespaltenen Kiemen von Schizophyllum commune unterscheiden. Die Crimped Gill ist weniger verbreitet, aber unverwechselbar, wenn sie gefunden wird."

Schritt 2: Nähragarplatten für S. Commune zum Wachsen herstellen

Um eine Kultur der S. Commune zu isolieren, die Sie gefunden haben, benötigen Sie einige Petrischalen, die mit Nahrung für den Pilz gefüllt sind. Malzextrakt-Agar ist ein einfach zuzubereitendes Nahrungsmittel für S. Commune, oder "Nährstoffmedien", die mit leicht zugänglichen Zutaten hergestellt werden können. Es ist auch eine gute Nahrungsquelle für enzymatische Assay-Experimente mit S. Commune und anderen Weiß- oder Braunfäulepilzen ~~ Dieser Prozess wird in einem anderen anweisbaren behandelt.

NEBENHINWEIS: Wenn Sie S. Commune nicht finden konnten, gibt es viele andere Pilze in derselben Familie, die mit den gleichen Verfahren kultiviert werden können und genauso gut, wenn nicht sogar besser, endokrin wirksame Schadstoffe abbauen. Truthahnschwanz (Trametes Versicolor) wurde in vielen Studien gefunden, in denen Hunderte von Weiß- und Braunfäulepilzen als die höchsten Produzenten der "lignocellulosehaltigen" Enzyme angesehen wurden, die die petrochemische Verschmutzung abbauen. Auch Austernpilze eignen sich dafür sehr gut.

Ich mache meine mikrobiologische Arbeit in einem Gemeinschaftsbiologielabor namens BUGSS (Baltimore Underground Science Space), wo ich Zugang zu Glaswaren, digitalen Waagen, graduierten Zylindern, einem Autoklaven (für die Hitze- und Drucksterilisation der Medien) usw. habe in den letzten zehn Jahren auf der ganzen Welt entstanden, also sollten Sie diese Liste überprüfen, um zu sehen, ob es eine in Ihrer Nähe gibt. Wenn Sie in Ihrer Nähe kein großartiges Community-Labor haben, müssen Sie in eine Grundausstattung für diesen Prozess investieren, wie zum Beispiel:

1 ~ Eine digitale Waage zum genauen Abmessen Ihrer Zutaten

2 ~ Ein Schnellkochtopf zum Sterilisieren Ihrer Medien mit Hitze und Dampf

3 ~ Petrischalen, kann ziemlich günstig online gekauft werden, wiederverwendbares Glas oder Einwegplastik funktioniert, aber wiederverwendbar ist immer besser:)

4 ~ Einige Glaswaren zum Mischen Ihrer Zutaten, Sterilisieren und Aufbewahren.

Wenn Sie nicht in diese Ausrüstung investieren möchten, können Sie auf Websites wie Amazon vorgegossene Malzextrakt-Agarplatten kaufen.

Es gibt bereits viele tolle Anleitungen und Youtube-Videos, wie Sie Ihre eigenen Nährmedien-Petrischalen zu Hause herstellen können. Anstatt also ins Detail zu gehen, verlinke ich nur ein paar – und stelle das Rezept für 2% Malzextrakt-Agar bereit, das sind die Nährmedien, die Sie verwenden werden.

Freshcap Musrooms: Anleitung zur Herstellung von Agarplatten für den Anbau von Pilzen zu Hause

Mykoweb: Erste Schritte mit dem Pilzanbau

Technisches Datenblatt Malzextrakt-Agar

2% Malzextrakt-Agar (MEA) ~~ Rezept für 1 Liter:

20g Malzextrakt (übliches Angebot für die Bierherstellung, kann online gekauft werden)

15 g Agar (Verfestigungsmittel - wird oft zum Kochen verwendet, damit es online oder in einigen Lebensmittelgeschäften gekauft werden kann)

1 Liter H20 (normalerweise verwende ich Umkehrosmosewasser, das in den meisten Lebensmittelgeschäften in Gallonenkrügen erhältlich ist)

Dieses Rezept kann leicht geändert werden, wenn Sie kleinere Mengen herstellen möchten. Ich mache zum Beispiel oft nur 250 ml auf einmal, also verwende ich am Ende nur 5 Gramm Malzextrakt, 3,75 Gramm Agar und 250 ml Wasser.

Schritt 3: Inokulieren Sie Ihre Petrischale mit Pilzen

Der Pilz, den Sie sehen, wird „Fruchtkörper“genannt, er ist nur ein kleiner Teil des Organismus. Der Großteil seines Körpers ist im Baum (oder im Boden) versteckt und verbraucht das Holz. Dieser Teil des Pilzes wird Myzel genannt. Um den weißen filamentösen, tentakulären, rhizomatischen Myzelkörper von Schizophyllum Commune auf einer Petrischale zu kultivieren, nehmen Sie eine Probe des Stiels, sterilisieren und legen Sie sie auf Ihre MEA-Platten. Myzel wird aus der sterilisierten Kernprobe des Pilzstamms wachsen und die Petrischale besiedeln, die wie eine weiße Baumwollmatte aussieht.

Du brauchst:

• Die Malzextrakt-Agar (MEA)-Platten, die Sie im vorherigen Schritt vorbereitet haben
• 70% Isopropylalkohol (Reinigungsalkohol) und eine Sprühflasche
• Papiertücher
• Skalpell oder einfach nur ein Rasiermesser aus rostfreiem Stahl - Kastenschneider funktioniert
• Metallpinzette
• Handschuhe
• Eine Flamme -- Ich benutze eine Alcohaul-Lampe zum Sterilisieren von Instrumenten, NonDisjunction hat hier eine großartige Anleitung, wie man eine macht.
• Sterile Oberfläche zum Anschneiden (ich habe dafür nur eine sterile Petrischale verwendet)
• Parafilm, eine Paraffinfolie, die zum Versiegeln von Petrischalen verwendet wird – Sie können auch einfach Abdeckband verwenden, wenn Sie dies nicht haben

STERILTECHNIK:

Das Wichtigste, was Sie bei der Verwendung der sterilen Technik beachten sollten, ist, dass ständig Bakterien und Sporen in die Luft fallen. Daher möchten Sie Ihre Petrischalen so gut wie möglich bedeckt halten. Wenn Sie die Deckel anheben, um Medien zu gießen oder zu impfen, ist es immer am besten, den Deckel direkt über der Schale zu halten, damit Sie horizontal auf das Innere zugreifen können, aber den Deckel über der Schale halten, um zu verhindern, dass Bakterien hineinfallen sind ein riesiges Konglomerat aus menschlichen, bakteriellen, pilzlichen und anderen Organismen ~~ Obwohl Sie es nicht sehen können, sind Sie von einer dichten Wolke von Mikroben umgeben, die von Ihrem Körper wegdiffundieren. Anstatt nur auf der Hautoberfläche zu sitzen, erstreckt sich Ihr Mikrobiom in die Luft ~~ sooooooo, wedeln Sie niemals mit den Händen über die Petrischale oder beugen Sie sich über die offene Schale, um hineinzusehen. Und tragen Sie Handschuhe, wenn Du hast sie;)

RICHTEN SIE IHREN HALBSTERILEN ARBEITSPLATZ EIN

Wählen Sie eine porenfreie Arbeitsfläche, die frei von Schmutz und Müll ist. Sprühen Sie den Bereich mit Ihrer 70%igen Isopropylalkohollösung ein und wischen Sie ihn mit einem Papiertuch ab. Stellen Sie Ihre Flamme in die Mitte Ihres Arbeitsbereichs und zünden Sie sie an. Sie sollten so nah wie möglich an der Flamme arbeiten, da sie ein kleines steriles Feld um sie herum erzeugt. Legen Sie Ihre MEA-Platten auf eine Seite und Ihre Pilzprobe auf eine sterile Schneidefläche auf der anderen Seite. Normalerweise verwende ich eine sterile Petrischale als sterile Schneidefläche sowie als Werkzeugablage. Gießen Sie etwas Isopropylalkohol in ein kleines Glas – Sie werden dies verwenden, um Ihre Klinge und Pinzette während der Arbeit zu sterilisieren.

*¡~ IMPFEN ~!*

Bevor Sie etwas tun, sterilisieren Sie Ihre Klinge und Pinzette, indem Sie sie in die Isopropylalch eintauchen und sie dann ein wenig über die Flamme halten. Legen Sie sie nach der Sterilisation auf Ihre sterile Schneidefläche, wenn Sie sie ablegen. Halte den Pilzstiel mit der Pinzette ruhig und schneide ein Stück davon ab. Nehmen Sie dieses Stück und schneiden Sie alle Seiten so ab, dass Sie am Ende einen kleinen Würfel aus dem Pilzstielkern erhalten, bei dem alle äußeren Oberflächen entfernt wurden. Dies hilft dabei, alle anderen Mikroben, die auf dem Pilz leben, loszuwerden, damit sie Ihre Kultur nicht kontaminieren. Tauchen Sie dann den Stielkern etwa 30 Sekunden lang in das Isopropyl, ziehen Sie ihn heraus und lassen Sie ihn im sterilen Feld der Flamme trocknen (benutzen Sie nicht die Flamme zum Trocknen, dies tötet den Pilz ab). Sterilisieren Sie Ihre Pinzette erneut mit der Flamme, während Sie warten, bis der Stielkern getrocknet ist. Heben Sie dann einfach den Deckel einer Ihrer MEA-Platten gerade so weit an, dass die Pinzette von der Seite eingeschoben wird, und verwenden Sie die sterilisierte Pinzette, um den Stielkern in der Mitte der Platte zu platzieren. Versiegeln Sie die Platte mit Parafilm, und in den nächsten Wochen sollten Sie sehen, dass S. Commune-Myzel die Platte besiedelt.

Normalerweise mache ich mehrere Platten, wenn ich mit Wildproben arbeite, damit ich bei einer Kontamination eher mindestens eine saubere Kultur habe.